目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体.方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经NiNTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度.结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中.纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度＞l:32 000.结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础.
作者：吴赟；陈洪；黄孝天；陈宏新；刘晶星
来源：上海第二医科大学学报 2004 年 24卷 9期
