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目的·探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多聚磷酸盐激酶2(polyphosphate kinase 2,PPK2)核酸适配体对体外MTB的抑菌效果.方法·运用生物信息学方法分析MTB PPK2与呼吸道部分常见病原菌的同源性,构建PPK2进化树.通过酶联寡核苷酸分析(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)测定PPK2核酸适配体与MTB标准株H37Rv、卡介苗(BCG)、耻垢分枝杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的结合亲和力.将PPK2核酸适配体加入血清中孵育24 h,运用琼脂糖凝胶电泳分析其在血清中的生物稳定性.采用微量刃天青显色法测定PPK2核酸适配体对H37Rv的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC).将H37Rv与1μ.mol/L的PPK2核酸适配体在罗氏培养基上培养10d,观察菌落生长情况.运用酶标仪测定与不同浓度的PPK2核酸适配体共培养10d后H37Rv菌液的D(600 nm)值,观察PPK2核酸适配体对H37Rv生长的影响.结果·生物信息学方法构建的PPK2进化树显示,H37Rv的PPK2蛋白与呼吸道部分常见病原菌亲缘性较远,与铜绿假单胞菌亲缘关系相对较近.ELONA测定结果显示PPK2核酸适配体能与H37Rv选择性结合.琼脂糖凝胶电泳分析显示PPK2核酸适配体在血清中至少稳定存在8h.PPK2核酸适配体对H37Rv的MIC为50 nmol/L.罗氏培养基菌落生长结

作者:杨扬;李岱容;黎友伦;陈雨晗;万秋;刘静姝

来源:上海交通大学学报(医学版) 2018 年 38卷 1期

知识库介绍

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杨扬;李岱容;黎友伦;陈雨晗;万秋;刘静姝
来源:
上海交通大学学报(医学版) 2018 年 38卷 1期
标签:
多聚磷酸盐激酶 核酸适配体 结核分枝杆菌 抑菌活性 polyphosphate kinase aptamer Mycobacterium tuberculosis antibacterial activity
目的·探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多聚磷酸盐激酶2(polyphosphate kinase 2,PPK2)核酸适配体对体外MTB的抑菌效果.方法·运用生物信息学方法分析MTB PPK2与呼吸道部分常见病原菌的同源性,构建PPK2进化树.通过酶联寡核苷酸分析(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)测定PPK2核酸适配体与MTB标准株H37Rv、卡介苗(BCG)、耻垢分枝杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的结合亲和力.将PPK2核酸适配体加入血清中孵育24 h,运用琼脂糖凝胶电泳分析其在血清中的生物稳定性.采用微量刃天青显色法测定PPK2核酸适配体对H37Rv的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC).将H37Rv与1μ.mol/L的PPK2核酸适配体在罗氏培养基上培养10d,观察菌落生长情况.运用酶标仪测定与不同浓度的PPK2核酸适配体共培养10d后H37Rv菌液的D(600 nm)值,观察PPK2核酸适配体对H37Rv生长的影响.结果·生物信息学方法构建的PPK2进化树显示,H37Rv的PPK2蛋白与呼吸道部分常见病原菌亲缘性较远,与铜绿假单胞菌亲缘关系相对较近.ELONA测定结果显示PPK2核酸适配体能与H37Rv选择性结合.琼脂糖凝胶电泳分析显示PPK2核酸适配体在血清中至少稳定存在8h.PPK2核酸适配体对H37Rv的MIC为50 nmol/L.罗氏培养基菌落生长结