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目的·观察miR-760对人食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)TE-10细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响并初步探究其机制.方法·应用反转录 – 定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting检测miR-760和c-Myc在5个ESCC细胞株(正常食管鳞状上皮细胞作为对照)和14例ESCC组织(癌旁组织作为对照)标本中的mRNA与蛋白表达水平.使用miR-760的模拟物、抑制剂(miR-mimics组、miR-inhibitor组)及模拟物阴性对照、抑制剂阴性对照(mimics-NC组、inhibitor-NC组)转染TE-10细胞,通过RT-qPCR验证miR-760的过表达和抑制效率以及c-Myc在mRNA水平的表达变化.CCK-8和集落形成实验检测miR-760对TE-10细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡比例的变化;Western blotting分析c-Myc蛋白及细胞周期、凋亡、迁移和侵袭等相关蛋白表达水平的变化.通过双荧光素酶实验验证miR-760与c-Myc的靶向结合作用.结果 ·5个ESCC细胞株的miR-760表达水平均低于正常食管鳞状上皮细胞,而c-Myc mRNA和蛋白的表达水平高于正常食管鳞状上皮细胞;在癌组织中miR-760的表达水平较癌旁组织降低,而c-Myc mRNA和蛋白的表达水平较癌旁组织升高.与mimics-NC组相比,miR-mimics组的细胞增殖能力降低,细胞形成的集落数目减少,

作者:杨雪涛;王小文;吴庆琛

来源:上海交通大学学报(医学版) 2019 年 39卷 11期

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作者:
杨雪涛;王小文;吴庆琛
来源:
上海交通大学学报(医学版) 2019 年 39卷 11期
标签:
miR-760 食管鳞状细胞癌 c-Myc 靶基因
目的·观察miR-760对人食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)TE-10细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响并初步探究其机制.方法·应用反转录 – 定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting检测miR-760和c-Myc在5个ESCC细胞株(正常食管鳞状上皮细胞作为对照)和14例ESCC组织(癌旁组织作为对照)标本中的mRNA与蛋白表达水平.使用miR-760的模拟物、抑制剂(miR-mimics组、miR-inhibitor组)及模拟物阴性对照、抑制剂阴性对照(mimics-NC组、inhibitor-NC组)转染TE-10细胞,通过RT-qPCR验证miR-760的过表达和抑制效率以及c-Myc在mRNA水平的表达变化.CCK-8和集落形成实验检测miR-760对TE-10细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡比例的变化;Western blotting分析c-Myc蛋白及细胞周期、凋亡、迁移和侵袭等相关蛋白表达水平的变化.通过双荧光素酶实验验证miR-760与c-Myc的靶向结合作用.结果 ·5个ESCC细胞株的miR-760表达水平均低于正常食管鳞状上皮细胞,而c-Myc mRNA和蛋白的表达水平高于正常食管鳞状上皮细胞;在癌组织中miR-760的表达水平较癌旁组织降低,而c-Myc mRNA和蛋白的表达水平较癌旁组织升高.与mimics-NC组相比,miR-mimics组的细胞增殖能力降低,细胞形成的集落数目减少,