目的:评价角质形成细胞中热休克蛋白90(heat shock protein 90,Hsp90)表达水平与小细胞外囊泡(small ex-tracellular vesicles,sEVs)数量的 关系.方法:采用人角质形成细胞株(HaCaT),分为野生型组、短发夹RNA干扰组(shRNA组,Hsp90蛋白抑制剂)和格尔德霉素抑制组(17-AAG组,Hsp90低表达),进行体外培养.以超速离心法收集各组培养体系中的sEVs,利用透射电镜观察其形态学特征;蛋白质免疫印迹法鉴定生物学特性;纳米颗粒跟踪分析检测粒子数量.采用GraphPad Prism 8.0软件包中的t检验(非参数Mann-Whitney U检验)统计分析各组之间sEVs的数量差异.结果:超速离心法获得的HaCaT细胞来源的sEVs符合形态学和生物学鉴定标准,sEVs中Hsp90蛋白无明显表达.shRNA干扰角质形成细胞中的Hsp90AA1表达后,其sEVs数量上升.第5天时,shRNA干扰组的sEVs 粒子数为[(177.4±4.18)×108,n=3],与空载质粒组的粒子数[(82.34±4.83)×108,n=3]相比显著升高(P＜0.000 1).17-AAG 抑制 Hsp90蛋白5天后,17-AAG 组的粒子数为[(652.5±26.73)×108,n=3],对照组粒子数为[(262.22±5.44)×108,n=3],差异具有统计学意义(P＜0.000 1).结论:低表达Hsp90蛋白可促进HaCaT细胞分泌sEVs,sEVs可能与炎症状态下上皮细胞和免疫细胞间的物质传递有关.

作者：陈俊；孙凯；潘蕾；杜观环；宋晨成；陈俊俊；杨成龙；王宇峰；唐国瑶

来源：上海口腔医学 2022 年 31卷 2期