目的 构建金黄仓鼠载脂蛋白A5(Apoa5)基因表达载体以及在不同组织中的表达差异分析,为深入研究Apoa5基因在金黄仓鼠不同组织中功能奠定基础.方法 提取金黄仓鼠肝脏组织总RNA,采用RT-PCR方法对金黄仓鼠Apoa5基因的cDNA进行克隆,构建Apoa5基因表达载体并将其转染293T细胞,分别采用RT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白质表达水平.采用荧光定量PCR检测并分析Apoa5 mRNA在8个组织中的表达量.结果 经PCR检测鉴定,Apoa5基因表达载体构建成功,经测序分析金黄仓鼠Apoa5基因cDNA全长1 243 bp,编码366个氨基酸,与人、大鼠、小鼠等物种比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性,金黄仓鼠与人、大鼠、小鼠的氨基酸同源性分别为75％、84％、84％.转染293T细胞48 h后,RT-PCR和Western blot结果表明,Apoa5基因在mRNA和蛋白质水平都有表达.荧光定量PCR结果显示,Apoa5 mRNA在肝脏表达量最高,在脑和睾丸中中度表达,在心、脾脏、肺、肾、卵巢组织中低度表达.结论 成功构建Apoa5基因表达载体并分析其在不同组织中的表达差异,为制备Apoa5转基因金黄仓鼠动物模型以及研究Apoa5基因在金黄仓鼠脂类代谢中的功能奠定基础.
作者：董婉维；张婀娜；郭晓冲；魏政立；杨葳；周生来；赵文；郑志红
来源：实验动物与比较医学 2015 年 35卷 4期
