目的 构建pcDNA3.1/人TSH受体(human thyroid-stimulating hormone receptor,hTSHR)基因真核表达载体(已完成),将该真核表达载体在CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)中表达,并筛选获得稳定表达细胞株.方法 通过脂质体介导,用重组质粒pcDNA3.1-hTSHR转染CHO细胞,以G 418筛选稳定表达细胞株,挑取单克隆,扩大培养并传代;取P5代细胞,抽提基因组DNA及蛋白分别用PCR及Western blot方法鉴定被转染CHO细胞hTSHR的表达情况.结果 得到阳性单克隆5个,传代培养.P5代细胞PCR扩增产物为约530 bp特异性条带,大小与预期相符,未见非特异性条带.Western 印记法结果表明被转染CHO传代细胞有hTSHR蛋白表达.结论 pcDNA3.1-hTSHR真核表达载体可以在CHO细胞中稳定表达,成功构建稳定表达细胞株.为测定自身免疫性甲状腺疾病患者血清TSHR奠定了基础.
作者：张洪梅；周亚芹；董艳；冯绮文；李晓永；苏青
来源：同济大学学报(医学版) 2009 年 30卷 3期
