目的：建立依赖核酸序列扩增技术（NASBA）检测呼吸道合胞病毒（RSV）的方法。方法依据美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因数据库，利用 Primer 5软件进行 RSV 特异性引物设计。收集经免疫荧光法检测确认 RSV 阳性的咽拭子样本，以同批检测 RSV 阴性样本作为阴性对照。优化样本处理条件和扩增反应体系，建立 NASBA 检测 RSV 的方法，并与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）进行比较。结果采用直接冻融法处理咽拭子样本，取上清检测；引物设计原则为引物加 T7启动子序列。NASBA 在 RSV RNA 标准品浓度为2.81×102拷贝/μL 时仍能检测出目的片段，而 RT-PCR 在2.81×104拷贝/μL 时目的条带隐约可见，提示 NASBA的灵敏度比 RT-PCR 高出至少100倍。NASBA 在7例 RSV 阳性咽拭子样本中特异性扩增出 RSV RNA，而在其他病毒阳性（包括流感病毒 A 阳性2例、副流感病毒3阳性2例、腺病毒阳性1例）及 RSV 阴性（3例）样本中未见目的条带，提示 NASBA 的特异性较高。结论建立的 NASBA 特异性强、灵敏度高、耗时相对较短，克服了目前实验室病毒检测方法的局限性，为 RSV 的检测提供了有效的实验室检测手段。
作者：杨海鸥；叶星晨；傅启华
来源：检验医学 2016 年 31卷 3期
