目的 探讨小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白(MYOC)基因C1009缺失突变(MYOC-C 1009del)对体外人小梁网细胞(HTMC)功能及核因子κB(NF-κB)通路的影响.方法 针对MYOC基因野生型及C1009del突变型分别构建慢病毒质粒载体pLVX-3FLAG-MYOC-EGFP(简称rLV-MYOC)和pLVX-3FLAG-MYOC-mut-EGFP(简称rLV-MYOC-mut).慢病毒质粒经包装和纯化后体外感染HTMC,以空白HTMC及感染空质粒病毒的HTMC作为2组空白对照,感染48 h后用于后续功能实验.采用流式细胞术检测HTMC的凋亡率及细胞周期;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞存活情况;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测NF-κB及其抑制因子(IκB)的mRNA表达情况;采用免疫印迹法检测NF-κB和IκB的蛋白质表达水平.结果 与感染rLV-MYOC的HTMC相比,感染rLV-MYOC-mut的HTMC呈现细胞G1期缩短、S期延长(P＜0.05),而细胞凋亡率和细胞存活率二者之间差异均无统计学意义(P＞0.05).感染rLV-MYOC-mut的HTMC的NF-κB mRNA和IκB mRNA表达水平均明显低于感染rLV-MYOC的HTMC(P＜0.05),而在蛋白质表达水平上,感染rLV-MYOC-mut的HTMC的NF-κB表达水平与感染rLV-MYOC的HTMC持平,而IκB的表达水平在感染rLV-MYOC-mut的HTMC中呈下降趋势(P＜0.05).结论 MYOC基因C1009de

作者：李萍；许涛；谢小兵；张贞；胡燕；苏敏；那婧婧

来源：检验医学 2017 年 32卷 10期