目的:通过优化实验条件,建立大鼠胚胎整体原位杂交方法.方法:E8.5-E10.5大鼠胚胎4％多聚甲醛固定6h,不经蛋白酶K消化；E11.5-E12.5胚胎4％多聚甲醛固定过夜,蛋白酶K系列稀释实验确定消化浓度和时间.E8.5-E12.5胚胎预杂交2h,地高辛标记的甘油二酯激酶ζ(DGKζ)寡核苷酸探针杂交24h,山羊血清封闭2.5～3h,地高辛抗体4℃过夜,冷TBST和NTMT漂洗1～2h,NBT/BCIP避光显色.应用免疫组织化学方法观察DGKζ在E12.5大鼠胚胎组织的表达.结果:DGKζ在不同胚龄大鼠胚胎均有清晰的杂交信号,主要集中在神经系统；E12.5大鼠胚胎脑泡、背根神经节有较强表达,与免疫组化结果一致.结论:本研究建立了简便、可行、重复性高的E8.5-E12.5大鼠胚胎整体原位杂交方法.
作者：张吉霞；蔡玉瑾；谢耀丽；李海荣；乔从进；崔慧林
来源：神经解剖学杂志 2013 年 29卷 3期
