通过对K562细胞基因表达谱芯片杂交影响因素的研究表明,用限制性显示技术[1]制备的cDNA探针长度较均一,适合基因芯片杂交;在42℃条件下含甲酰胺的杂交液中杂交16～20h,可保证样品的有效杂交,并表现出很好的杂交特异性;用RD-PCR或线性PCR对少量样品进行扩增,并用荧光(Cy3或Cy5)标记的通用引物对样品进行标记,可提高芯片检测的灵敏度;一次杂交反应总RNA的用量仅需0.5～10μg,在每cm2约含1000～1500个点的阵列中杂交时,标记样品用量1～2μg为宜;用PCR产物纯化柱对荧光标记产物进行纯化,可大大减小背景荧光,提高信噪比;同一批芯片经同一样品杂交结果的重复性很好,相关系数高达97.8
作者：祝骥；马文丽；李凌；毛向明；郑文岭
来源：生命科学研究 2004 年 8卷 2期
