研究以皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)体内存在的2条Δ5 Fad (Hdhfad1和Hdhfad2)为目的基因,β-肌动蛋白(β-actin)和核糖体蛋白S9(Ribosomal protein S9, RPS9)为内参基因,应用2-ΔΔCt方法建立了实时荧光定量PCR (Real-Time quantitative PCR, RT-qPCR)检测体系,并应用此体系分析了鲍鱼肌肉组织Δ5 Fad在不同饲料处理下的表达差异。实验饲料含有不同的脂肪源,分别是棕榈酸甘油酯(Tripalmitin, TP 饲料)、富含二十碳四烯酸(Arachidonic acid, ARA)的油脂(AO饲料)和富含二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid, EPA)的油脂(EO 饲料)。结果表明：针对 Hdhfad1、Hdhfad2、β-actin 和 RPS9所设计的引物特异性强。各引物对的PCR 扩增效率(Efficiency, E)分别为1.05、0.99、0.97和0.98,满足2-ΔΔCt方法对 E 的要求。当退火温度为52℃,反应体积为25μL时, RT-qPCR的扩增效果最好。所建立的体系能够准确定量Δ5 Fad的基因表达。利用该方法分析Δ5 Fad在不同饲料处理下的表达结果显示,与TP对照组相比, EO和AO饲料显著降低了鲍鱼肌肉组织Δ5 Fad(Hdhfad1和Hdhfad2)的表达量。
作者：李明珠；麦康森；何艮；艾庆辉；徐玮；张文兵
来源：水生生物学报 2014 年 2期
