目的:构建结核分枝杆菌(MTB)Rv1759c结构域(Rv1759cD domain,Rv1759cD)于人IL-2(hIL-2)融合基因,并在大肠杆菌中表达获得重组的融合蛋白Rv1759cD-IL-2.方法:用PCR方法从MTB H37Rv基因组扩增Rv1759cD基因片段,测序后与hIL-2基因构建融合基因,并克隆到表达载体pProEX HTa.融合基因在大肠杆菌DH5α中诱导表达,经SDS-PAGE分析后,分别与HismAb、IL-2mAb和结核病人血清进行Western-blot鉴定,采用Ni.NTA亲和层析纯化蛋白.结果:获得的Rv1759cD基因经测序与GenBank公布的序列完全一致,与hlL-2基因连接后,构建的融合基因在大肠杆菌中有效表达.表达蛋白相对分子量为30KDAa,与预测值相符;Western-blot结果显示,在相对分子量30KDAa处分别与His mAb和鼠抗IL-2mAb形成结合带,并与结核病人血清出现特异性结合.通过Ni-NTA亲和层析,可得到纯化的目的蛋白.结论:成功表达、纯化和鉴定了Rv1759cD-IL-2融合蛋白,并有可能作为新型结核病疫苗的靶抗原.
作者：师长宏；江鹰；毛峰峰；赵勇；张彩勤；赵善民；白冰；陈涛
来源：现代生物医学进展 2011 年 11卷 6期
