目的:构建一个高效且特异性的逆转录茎环引物,以准确定量检测小鼠的miRNA-505基因,同时探讨茎环引物的结构对逆转录效率的影响.方法:规律性地改变通用茎环引物的茎部和环部的碱基结构,再进行不同的组合,利用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术,探寻效率最高的茎环引物.结果:当固定茎部结构为14对碱基,规律性改变环部碱基个数(15,18,21),经RT-PCR检测的CT值无差异,均为28.5;当固定环部结构为21个碱基,CT值随茎部碱基对(8,11,14)规律性地延长而逐渐增大;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时CT值最小,为26.7.结论:环部结构对茎环引物的效率无贡献;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时,茎环引物的效率和特异性是最佳的,适用于准确检测小家鼠的miRNA-505基因.
作者：熊黎；仝莉；王茂春；周宇荀；李凯；肖君华
来源：现代生物医学进展 2015 年 15卷 27期
