目的:通过特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),使CDK4基因沉默,探讨该基因沉默对肺癌A549细胞增殖和代谢的影响及其可能的作用机制.方法:将靶向CDK4小干扰RNA(siRNA-CDK4)和阴性对照干扰片段(siRNA-control)成功转染A549细胞后,利用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测CDK4在mRNA和蛋白水平的变化;细胞计数法、CCK-8法和软琼脂糖克隆形成实验检测A549增殖的变化和克隆形成能力;FCM法检测A549细胞的细胞周期;18F-FDG摄取实验、乳酸检测试剂盒及海马技术检测A549细胞中葡萄糖、乳酸的量及氧耗的变化;利用RT-PCR检测CDK4基因沉默后A549细胞中糖代谢相关酶mRNA水平的变化.结果:将靶向CDK4小干扰RNA(siRNA-CDK4)转染A549细胞后,可明显抑制CDK4的mRNA和蛋白表达(P＜ 0.001,P＜0.01).CDK4蛋白抑制后,细胞增殖在48、72和96h均明显降低(P值均＜0.05),G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显减少(P值均＜0.05);18F-FDG摄取量下降(42.21±1.90)％(P＜0.05),乳酸的生成量减少(29.39±5.35)％(P＜0.05),而细胞的基础耗氧量增加(67.17± 3.58)％(P＜ 0.01);糖酵解相关酶PFKFB3、PKM2、LDHA在mRNA水平均明显减低(P＜0.001,P＜0.01,P＜0.001).结论:抑制CDK4表达可明显降低糖酵解水平,并增加耗氧量;同时

作者：贾文芝；赵小平；赵丽；黄钢；刘建军

来源：现代生物医学进展 2016 年 16卷 24期