目的:研究肺泡巨噬细胞(NR8383)不同蛋白酶体激活程度对内质网应激的影响.方法:构建UbG76V-GFP融合蛋白,将含有UbG76V-GFP的质粒导入NR8383细胞,筛选出可稳定表达UbG76V-GFP的细胞系,通过蛋白酶体抑制剂(MG132)、蛋白酶体激活剂(阿霉素)干预蛋白酶体活性.荧光显微镜观察不同蛋白酶体活性下大鼠肺泡巨噬细胞在缺氧复氧2h、4h、6h时蛋白酶体活性,Western blot及PCR技术检测不同蛋白酶体活性下大鼠肺泡巨噬细胞在缺氧复氧2h、4h、6h时泛素化蛋白及内质网应激相关基因的表达.结果:在缺氧复氧2h、4h、6h这3个时间点,加入MG132组大鼠肺泡巨噬细胞绿色荧光及泛素化蛋白(Ubiquitin)表达明显降低(P＜0.05),而PCR及Western blot示内质网应激基因BIP(免疫球蛋白结合蛋白)、XBP-1 (X-盒结合蛋白)和CHOP(C/EBP同源蛋白)平均扩增量及蛋白表达量明显增加(P＜0.05);加入阿霉素组大鼠肺泡巨噬细胞在缺氧复氧2h、4h、6h表现出相反的实验结果,绿色荧光及Ubiquitin蛋白相对表达均明显增加(P＜0.05),而PCR及Western blot示内质网应激基因BIP、XBP-1和CHOP平均扩增量及蛋白表达量明显增加(P＜0.05).结论:本实验结果表明活细胞泛素-蛋白酶体活性程度与内质网应激存在紧密联系,外源性增强泛素蛋白酶体活性会抑制内质网应激,外源性
作者：范涛；耿庆；张博友；徐瑶；汪巍；潘世泽；胡浩
来源：现代生物医学进展 2017 年 17卷 4期
