目的:探讨SD大鼠肺微血管周细胞(rat pulmonarymicrovessel pericytes,RPMPC)的分离、培养与鉴定方法.方法:采用机械剪切、Ⅰ型胶原酶消化法和微孔过滤结合超高速离心法分离大鼠肺微血管片段,用含15％胎牛血清(FBS)的高糖培养基(DMEM)进行培养,倒置显微镜观察原代RPMFC的形态及生长特性.免疫荧光法检测神经元-胶质抗原2(neuron-glial antigen 2,NG2),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(desmin)和CD31相关抗原的表达,同时应用免疫细胞化学法检测血小板源性生长因子受体p(PDGFR-β)的表达.CCK-8测定周细胞生长曲线.通过周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测细胞成管能力.结果:本方法培养获取的RPMPC纯度较高,并能连续传代.细胞48 h后爬出,呈长梭形、三角形等不规则形,8～10d细胞汇合,呈栅栏或旋涡状生长,无接触性抑制,前期可见有少量内皮细胞伴随生长,单核偶见双核,核呈卵圆形,胞浆丰富.PDGFR-β、α-SMA、NG2、desmin染色阳性,CD31阴性;周细胞与内皮细胞共培养形成管腔结构.结论:通过本方法能够获得纯度较高的肺微血管周细胞,且所获细胞具有周细胞的特性及功能.
作者：孙廉旭；王家伟；张莎；曹亮；王文
来源：现代生物医学进展 2018 年 18卷 6期
