目的:探讨miR-382-3p对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:用100 ng/mL的脂多糖(LPS)处理软骨细胞,记为LPS组,以正常培养的软骨细胞作为正常对照(NC)组.miR-NC、miR-382-3p、anti-miR-NC、anti-miR-382-3p转染至软骨细胞中,记为miR-NC组、miR-382-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-382-3p组;将miR-NC、miR-382-3p、si-NC、si-RASA1转染至软骨细胞后再用100 ng/mL的LPS处理,记为miR-NC+LPS组、miR-382-3p+LPS组、si-NC+LPS组、si-RASA1+LPS组;将miR-382-3p分别与pcDNA-NC、pcDNA-RASA1共转染至软骨细胞后再用100 ng/mL的LPS处理,记为miR-382-3p+pcD-NA-NC+LPS组、miR-382-3p+pcDNA-RASA1 +LPS组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-382-3p和Ras p21蛋白活化因子1 (RASA1)mRNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测RASA1、细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Cleaved-caspase-3)蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测miR-382-3p和RASA1的靶向关系.结果:LPS诱导的软骨细胞中miR-382-3p表达水平显著降低,RASA1表达水平显著升高,CyclinD1表达水平显著降低,Cleaved-caspase-3表达水平显著升高,细胞存活率显著降
作者:GILDAS ALOGO YING;焦建宝;梁东星;任路通;王一凡;王康
来源:现代生物医学进展 2020 年 20卷 13期