目的:克隆分泌型IgA(SIgA)相关基因-J链基因(IgJ)、多聚免疫球蛋白受体基因(pIgR)和IgA重链恒定区基因(IGHA),为进一步构建SIgA真核表达质粒奠定基础.方法:采用"基因组DNA剪接"技术,根据已发表的IgJ、pIgR和IGHA的核苷酸序列,通过计算机软件分别设计各个基因片段外显子的优化引物,从人外周血基因组DNA中直接扩增各基因的外显子序列;然后人工设计融合相邻外显子的融合引物,采用重叠PCR技术,把各基因片段的外显子串联起来形成全长编码序列.完成基因组DNA的体外剪接.扩增的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T Easy Vector中,通过DNA测序对阳性克隆进行分析鉴定.结果:PCR扩增的IgJ、pIgR和IGHA基因与预期大小一致;测序结果表明实验获得的上述基因与GenBank中的目标基因序列完全一致.结论:通过基因组:DNA剪接技术成功克隆人类SIgA 3个相关基因,提示此技术是合成多外显子cDNA的有效手段.
作者：张宝中；安小平；张昕；刘大斌；单云竹；周育森；童贻刚
来源：中国生物工程杂志 2008 年 28卷 6期
