目的:通过靶向抑制原癌基因Bmi-1表达,观察其诱导胆囊癌细胞凋亡及上调Caspase-3蛋白表达的效应,探讨其在胆囊癌形成中的机制.方法:通过前期成功构建miRNA-Bmi-1重组质粒转染GBC-SD细胞,然后将其分为miRNABmi-1、miRNAScramble、Lipofectamine、GBC-SD 4组,转染48h后采用RT-PCR和Western blot法检测各组Bmi-1 mRNA和蛋白的表达,倒置显微镜观察细胞生长情况;流式细胞技术检测细胞的凋亡率、细胞周期分布及Caspase-3蛋白表达水平.结果:RT-PCR和Western blot结果显示miRNABmi-1组细胞Bmi-1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).倒置显微镜观察显示miRNABmi-1组细胞死亡较对照组明显;细胞周期检测显示:miRNABmi-1组细胞阻滞于G0/G1 (72.20±1.71),G2/M和S期细胞减少(18.30±7.21,9.50±6.01),凋亡指数增高(49.83 ±5.19),Caspase-3蛋白表达量明显增加(30.37±8.l0),与对照组比较,具有显著性差异(P＜0.05).结论:靶向沉默Bmi-1能有效抑制胆囊癌细胞Bmi-1 mRNA及蛋白表达,诱导胆囊癌细胞凋亡,其机制可能是早期使胆囊癌细胞周期阻滞于G0/G1期,并上调了Caspase-3蛋白表达,Bmi-1可能参与调控线粒体依赖的凋亡途径.
作者：魏东；邹浩；王琳；王文举；骆志玲；张小文
来源：中国生物工程杂志 2013 年 33卷 12期
