目的:研究前蛋白转化酶枯草溶菌素6 (proprotein convertase subtilisin/ kextin type 6,PCSK6)对可溶性corin的活化作用,以及PCSK6作用后的可溶性corin是否具有生物学活性.方法:以野生型corin质粒为模板,通过PCR扩增出不合跨膜区的corin基因片段,并将目的基因克隆至真核表达载体pSEC得到重组质粒pSECsolCorin,测序验证.分别将可溶性corin、PCSK6及心钠肽前体(pro-atrial natriuretic peptide,pro-ANP)的表达载体转染人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293细胞,收取上清液.然后将可溶性corin上清液与不同体积的PCSK6上清液共同孵育,免疫印迹(Western blot)方法检测corin蛋白的活化情况.再将PCSK6作用后的可溶性corin与pro-ANP上清液共孵育,检测可溶性corin的生物学活性.结果:构建了可溶性corin的表达质粒,并在HEK293细胞成功表达可溶性corin蛋白.可溶性corin的上清液与pcsk6上清液共同孵育后可检测到活化条带,并可使pro-ANP活化为ANP.结论:PCSK6同样可以剪切活化可溶性corin蛋白,活化后的corin具有生物学活性.为可溶性corin用于心衰的临床治疗提供了重要基础.
作者：李枫；周田甜；刘萌；董宁征
来源：中国生物工程杂志 2016 年 36卷 7期
