目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素.方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密码子优化,P16为哺乳动物细胞密码子优化,而W16为野生型序列)分别克隆于毕赤酵母表达质粒pPinkTM-HC(高基因拷贝菌落筛选)和pPinkTM-LC(低基因拷贝菌落筛选),并转化不同蛋白酶缺陷的宿主菌.甲醇诱导24小时后,取菌体样品经Western blot分析L1蛋白的表达.结果:M16显示了最高的表达水平,其次是Y16与P16,而W16几乎无表达.基因序列密码子应用特征分析显示,4个基因的密码子适应指数从高到低依次为Y16、M16、W16和P16.通过自由能和GC含量分析4个序列的mRNA二级结构,Y16为-409.40 kcal/mol和43.85％;M16为-451.50 kcal/mol和47.83％;P 16为-606.50kcal/mol and 64.10％;W16为-384.70 kcal/mol and 38.01％.蛋白酶缺陷菌株L1表达高于野生型菌株,质粒pPinkTM-HC与pPinkTM-LC介导的表达无明显区别.结论:密码子优化操作显著改善了HPV 16 L1在毕赤酵母中的表达,但表达水平与密码子利用优劣并不完全对应,提示密码子优化仅是部分原因,而mRNA结构与稳定性变化值得探讨.蛋白酶缺陷菌株提高了H

作者：杨旭；黄惟巍；姚宇峰；刘存宝；孙文佳；白红妹；马雁冰

来源：中国生物工程杂志 2017 年 37卷 10期