通过目的基因的随机整合方式, 构建得到的CHO表达细胞系, 常会因为目的基因插入到染色体内不稳定区域, 而在长期传代过程中出现表达不稳定的现象, 这主要是由于位点效应所导致的.为了解决这个问题, 现利用CRISPR/Cas9技术介导的同源重组, 将目的基因直接整合于CHO细胞染色体上的稳定表达区域, 以克服位点效应带来的CHO表达细胞系的长期表达不稳定.利用该技术总共获得了2株外源基因(人白蛋白基因) 定点整合细胞系; Western blot结果显示, 细胞上清液的产物具有人白蛋白抗原性;细胞在贴壁状态下, 两株细胞系在第3、12、23、35、50代, 细胞每日表达的HSA质量接近, 且均维持在0. 5pg cell/d;选取一株表达细胞系, 经悬浮驯化后, 在批次条件培养下, 第1、25、50代的悬浮细胞, 在摇瓶内的表达浓度均稳定在13～14mg/L.显示了将外源基因定点整合于CHO细胞基因组内的可行性;且外源基因整合在稳定表达区域后, 重组细胞系具有对外源基因长期表达的稳定性.
作者：周松涛；陈蕴；龚笑海；金坚；李华钟
来源：中国生物工程杂志 2019 年 39卷 4期
