利用含有强启动子PAox1和α-MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA-pST.通过电击将经Sac Ⅰ酶切后线性化的pPICZαA-pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X-33菌中,并筛选Mut+表型的重组菌.表达产物的SDS-PAGE和Westem blot结果表明,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同.将经Sac Ⅰ酶切后线性化的pPICZαA-pST再次转化重组酵母细胞X-33/pPICZαA-pST(Mut+),所得表达产物的SDS-PAGE和Western blot结果显示,PST基因的表达水平明显提高,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原-抗体结合反应,表达量达956mg/L.将发酵液上清进行N-糖基化分析,显示rPST无N-糖基化加工修饰.
作者：欧阳菁；杨林；龙綮新；王珣章；邢珂；魏平华
来源：生物工程学报 2001 年 17卷 5期
