参照已发表的SARS冠状病毒BJ01株基因序列,利用计算机软件预测并选取该病毒S、M、N三种主要结构蛋白部分抗原性优势区域,以编码Gly-Pro-Gly序列相连接合成两段嵌合基因A和B.并分别克隆于pGEX-6p-1载体上用IPTG进行诱导表达,以纯化的嵌合蛋白A和B为抗原,分别免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体.利用单克隆抗体亚型检测试剂盒和SARS-CoV商品化ELISA检测试剂盒对其进行亚型和特异性鉴定.结果表明融合表达两段嵌合基因产物,其大小分别为34kD和35kD,Western blot分析证实两种表达产物都能被SARS病人康复期血清所识别.获得了6株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞克隆株.亚型鉴定结果除D3C5为IgG2a外其他单抗均为IgG1,而且所有单抗的轻链均为κ链.特异性鉴定发现除D3D1外,其余的5株单抗均能与SARS-CoV商品化ELISA检测试剂盒发生特异性反应.将D3D1与灭活后经超声波裂解的SARS-CoV进行Western blot分析,发现它能特异性识别180kD的蛋白带.分别融合表达了6个S蛋白的寡肽(S1-S6),并对筛选出的单克隆抗体相对应的抗原表位进行了初步鉴定.结果发现单克隆抗体D3D1特异性识别S2基因表达产物(S蛋白的447-458明),D3C5特异性识别S5基因表达产物(S蛋白的789-799aa).
作者：周艳君；华荣虹；王云峰；安同庆；刘金霞；杨金雨；华玉卓；童光志
来源：生物工程学报 2005 年 21卷 2期
