哺乳动物卵透明带3(Zona pellucida 3,ZP3)在诱导获能精子发生顶体反应中发挥着重要作用,其在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达.本研究在大肠杆菌中诱导表达可溶性的mZP3融合蛋白.并鉴定该蛋白的免疫活性.将小鼠卵透明带3克隆至pMAL-p2x质粒,转化至大肠杆菌BL21表达菌中.用不同温度、不同IPTG浓度、不同诱导时间及不同浓度的添加剂诱导目的蛋白表达,以筛选出mZP3融合蛋白可溶性表达的最佳条件.大量表达纯化后以Western blotting和ELISA检测蛋白的免疫活性.酶切鉴定及DNA测序表明mZP3已克隆入pMAL-p2x质粒.经优化诱导表达条件,筛选出mZP3融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当A600为0.6时添加0.02 mol/L葡萄糖,以0.6 mmol/LIPTG于25℃条件下诱导表达4 h.ELISA及Western blotting检测结果表明诱导表达的蛋白具有免疫活性.在大肠杆菌中表达并纯化获得可溶性mZP3蛋白,为mZP3免疫不育疫苗研制及其免疫效果检测提供了可溶性抗原.
作者：孙美玉；马正海；李永鑫；吕涛；陈开旭；张富春
来源：生物工程学报 2009 年 25卷 8期
