为制备重组狐狸生长激素(fGH),采用RT-PCR方法,从银狐垂体中扩增fOH cDNA基因,利用SnaB Ⅰ和Not Ⅰ位点将fGH基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽的下游,构建成fGH基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/fGH,载体经Sal Ⅰ酶切线性化后,通过电转移将线性化的pPIC9K/fGH转化到组氨酸缺陷型酵母宿主菌GS115中.然后利用不含氨基酸的以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His~+型和甲醇利用正型(Mut~+)酵母重组体,再经G418加压筛选出高拷贝fGH基因的重组酵母,经摇瓶发酵培养和甲醇诱导使fGH进行分泌表达.结果表明本实验扩增的fGH基因序列与GenBank发表的序列基本一致,发酵液经SDS-PAGE和Western blotting检测证明构建的重组酵母能够分泌表达fGH,表达的fGH占发酵液总蛋白的34
作者：李巍；李秀锦；仲飞；靳慧君；解民；刘玉芝；刘龙飞；苏清洁
来源：生物工程学报 2009 年 25卷 10期
