运用定向进化-易错PCR的方法,提高了华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的活力.经过两轮易错PCR和pNPP顶层琼脂法筛选,从第一轮和第二轮突变库中分别筛选获得最佳突变株1-11和2-28.脂肪酶酶活与野生菌株相比分别提高2倍和4倍.基因比对结果表明,突变脂肪酶2-28有4个氨基酸发生了突变:A129S、K161R、A230T、K322R.蛋白质分子空间结构模拟显示,突变A129S、K161R、A230T位于脂肪酶分子表面.突变A230T增强了α-螺旋盖结构的稳定性.突变K322R处在loop上,靠近脂肪酶底物结合区域,与邻近的Asp(带负电)形成盐桥.静电引力将该loop向底物进入酶活性中心的通道口反方向牵引,使底物分子更易进入酶活性中心.酶学性质研究表明,突变株2-28脂肪酶的K_m值比出发菌株下降了10
作者：王睿；喻晓蔚；沙冲；徐岩
来源：生物工程学报 2009 年 25卷 12期
