为比较两种筛选标记基因生产转人乳铁蛋白(hLF)基因克隆山羊的效率,利用单(新霉素抗性基因,Neor)、双(新霉素抗性和绿色荧光蛋白基因,Neor/GFP)标记基因筛选转基因的供核细胞,并制作体细胞核移植转基因山羊.山羊胎儿成纤维细胞电转染单标记基因表达载体(pBLC14)或双标记基因表达载体(pAPLM),分别有58.8％(20/34)和86.7％(26/30)的抗性细胞株检测到外源基因；转染pAPLM的细胞传代培养后,仅有20％ (6/30)株细胞在传代中所有细胞均能观察到荧光；分别以pBLC14和pAPLM的细胞株作为供核细胞进行体细胞核移植,共获得806枚重构胚胎,胚胎移植受体后35d、60 d妊娠率分别为53.8％、26.9％和39.1％、21.7％,最终分别产下5只(1.9％)和7只(1.4％)克隆山羊；经PCR及Southern blotting检测,所有出生山羊均整合有外源基因.结果显示,以单、双标记基因筛选供核细胞,其重构胚融合率、怀孕率和克隆动物出生率差异不显著(P＞0.05),Neor/GFP双标记基因能准确、有效地用于转基因供核细胞筛选.同时,结果也表明Neor/GFP双标记基因转染的体细胞作为供核细胞对体细胞克隆效率未出现不利影响.
作者：安礼友；袁玉国；于宝利；杨廷佳；成勇
来源：生物工程学报 2012 年 28卷 12期
