磷酸甘油酸脱氢酶(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase,PGDH,EC 1.1.1.95)为L-丝氨酸合成途径的关键酶,其编码基因为serA,其活性受到合成产物L-丝氨酸的反馈抑制调控.为解除丝氨酸的反馈抑制,采用定点突变技术把编码PGDH酶344位组氨酸或346位天冬氨酸或364位天冬氨酸的密码子定点突变为丙氨酸密码子.改造后的serAFbr被连到表达载体pT7-7上,并转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)中进行表达,破壁回收粗酶液,通过DEAE阴离子柱纯化PGDH突变体,并对其酶活性和IC50值进行了测定.结果,野生型PGDH酶IC50值为7 μmol/L,而PGDH双突变体N346A/H344A催化活性与野生型相近,在丝氨酸浓度为160 mmol/L时,其酶活仍保持未添加丝氨酸时酶活的96%,基本解除反馈抑制.
作者:邓辉;陈存武;孙传伯;韦传宝
来源:生物工程学报 2016 年 32卷 4期