组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抑制肿瘤迁移及侵袭.文中以人TIMP-2为研究对象,探索人TIMP-2蛋白的原核表达特征,并进行纯化及活性鉴定.以人肺癌A549细胞的总RNA反转录得到的cDNA为模板,克隆人TIMP-2基因,构建pET28a重组表达载体;经酶切检测和测序分析的重组表达载体pET28a-TIMP-2转入大肠杆菌EscherichiacoliBL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对表达条件进行优化.经镍亲和柱纯化后,用Western blotting法鉴定融合蛋白His-TIMP-2,并用明胶酶谱法检测融合蛋白的活性.研究发现融合蛋白His-TIMP-2在E.coliBL21(DE3)中以包涵体的形式存在;在一定范围内,IPTG浓度对His-TIMP-2的表达量没有显著影响;而在该表达系统中,诱导温度和时间是关键参数,His-TIMP-2的表达量随诱导温度升高而增加;纯化并复性后的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑制人肺癌A549细胞表达的基质金属蛋白酶的活性.具有活性的融合蛋白的获得为后续深入研究人TIMP-2的功能及机制奠定基础,并对肿瘤治疗具有重要意义.
作者:薛爱英;冯国兴;朱长春;樊赛军
来源:生物工程学报 2020 年 36卷 12期