L-天冬酰胺酶能够水解L-天冬酰胺生成L-天冬氨酸和氨,广泛存在于微生物、植物和部分啮齿类动物的血清中,在医药和食品行业中都具有重要应用.然而无论是在医药还是在食品行业中,L-天冬酰胺酶依然存在一些问题,如催化效率低、热稳定性差、产量低等.文中通过理性设计及5'非翻译区(5'untranslated region,5 'UTR)改造提高米黑根毛霉Rhizomucor miehei来源的L-天冬酰胺酶(RmAsnase)的酶活及蛋白表达量.结果 显示,通过同源建模结合序列比对分析构建的6个突变菌株中,突变酶A344E比酶活较野生酶提高了1.5倍.继而构建食品安全菌株枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/pMA5-A344E,对其进行UTR改造,获得重组菌株B.subtilis 168/pMA5 UTR-A344E,其酶活较原始菌提高了7.2倍,对重组菌B.subtilis 168/pMA5 UTR-A344E进行5L罐研究,最终产量为489.1 U/mLo该酶活提高的重组菌株对L-天冬酰胺酶的工业化应用具有重要价值.
作者：朱曼迟；张显；王志；林文萱；徐美娟；杨套伟；邵明龙；饶志明
来源：生物工程学报 2021 年 37卷 9期
