通过构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(GnT-V)的小片段发夹状RNA(shRNA)干扰表达质粒,研究了shRNA表达质粒沉默GnT-V基因后对LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.设计了靶向GnT-V基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA表达载体并转染人结肠癌LoVo细胞,通过G418筛选建立稳定低表达GnT-V基因的细胞株.分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测shRNA对GnT-V基因mRNA及蛋白质表达的影响.并通过CCK-8增殖实验、异质黏附实验、划痕愈合实验、趋化运动实验、细胞侵袭实验评价pGPU6/GFP/Neo GnT-VshRNA对人结肠癌LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.实验成功地构建了GnT-V shRNA表达质粒,并且该质粒明显下调GnT-V的表达,LoVo GnT-V/1564和LoVo GnT-V/2224的mRNA水平的抑制率分别为82
作者：贺富丽；马强；张健
来源：生物化学与生物物理进展 2009 年 36卷 8期
