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建立了以家鸽磁蛋白(clMagR)分离标签为基础的黄曲霉毒素氧化酶(AFO)分离纯化策略及黄曲霉毒素B1(AFB1)清除体系.将具有AFB1降解活性的AFO与clMagR基因共编码,采用pET-28a(+)载体构建了 pET-28a(+)-AFO-clMagR重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)宿主异源表达融合蛋白,并优化表达条件.随后,利用磁性纳米颗粒与磁蛋白的物理吸附,进行AFO的快速分离纯化及其对黄曲霉毒素B1的去毒率测定.结果表明:clMagR标签可增加AFO的可溶蛋白表达量;同时,融合clMagR的AFO具有良好的磁感应性,可通过与磁珠的吸附而被高效分离,纯化后的AFO对于AFB1的去毒率为75.94%,可循环使用13次.本研究为AFO的分离纯化及AFB1的生物去毒化研究提供了新策略,也为其他蛋白的分离纯化及应用提供了良好借鉴.

作者:马萌;高蓓;刘瑶;方波欢;江敏;朱通;张增辉;张鲁嘉

来源:生物加工过程 2021 年 19卷 1期

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作者:
马萌;高蓓;刘瑶;方波欢;江敏;朱通;张增辉;张鲁嘉
来源:
生物加工过程 2021 年 19卷 1期
标签:
磁蛋白 黄曲霉毒素氧化酶 蛋白分离 磁性纳米颗粒 去毒化 蛋白标签
建立了以家鸽磁蛋白(clMagR)分离标签为基础的黄曲霉毒素氧化酶(AFO)分离纯化策略及黄曲霉毒素B1(AFB1)清除体系.将具有AFB1降解活性的AFO与clMagR基因共编码,采用pET-28a(+)载体构建了 pET-28a(+)-AFO-clMagR重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)宿主异源表达融合蛋白,并优化表达条件.随后,利用磁性纳米颗粒与磁蛋白的物理吸附,进行AFO的快速分离纯化及其对黄曲霉毒素B1的去毒率测定.结果表明:clMagR标签可增加AFO的可溶蛋白表达量;同时,融合clMagR的AFO具有良好的磁感应性,可通过与磁珠的吸附而被高效分离,纯化后的AFO对于AFB1的去毒率为75.94%,可循环使用13次.本研究为AFO的分离纯化及AFB1的生物去毒化研究提供了新策略,也为其他蛋白的分离纯化及应用提供了良好借鉴.