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目的:简化操作流程,缩短提取时间,降低试验对操作者的危害.方法:该方法去除酚、氯仿等有害试剂,采用LiCl沉淀去除质粒制备物中小片段核酸(包括DNA和RNA);工程菌生长至对数期时通过加入氯霉素后不仅方便质粒DNA的提取过程中蛋白质的去除,而且可使质粒的拷贝数进一步增加,提高质粒DNA产量的目的.结果:实验改进方法所提取的质粒DNA产量高于常规方法,达到20μg/mL.结论:改进方法提取的质粒DNA,其下游的内切酶消化,PCR、重组质粒鉴定、转化大肠杆菌等实验的结果和重复性都令人满意,完全可用于一般的分子生物学研究.

作者:王友如

来源:生物技术 2006 年 16卷 6期

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作者:
王友如
来源:
生物技术 2006 年 16卷 6期
标签:
质粒 DNA提取 方法改进 纯化
目的:简化操作流程,缩短提取时间,降低试验对操作者的危害.方法:该方法去除酚、氯仿等有害试剂,采用LiCl沉淀去除质粒制备物中小片段核酸(包括DNA和RNA);工程菌生长至对数期时通过加入氯霉素后不仅方便质粒DNA的提取过程中蛋白质的去除,而且可使质粒的拷贝数进一步增加,提高质粒DNA产量的目的.结果:实验改进方法所提取的质粒DNA产量高于常规方法,达到20μg/mL.结论:改进方法提取的质粒DNA,其下游的内切酶消化,PCR、重组质粒鉴定、转化大肠杆菌等实验的结果和重复性都令人满意,完全可用于一般的分子生物学研究.