将PCR扩增的肉葡萄球菌铁离子过氧化物酶基因(fepB)的双精氨酸转运(Tat)信号肽DNA序列与绿色荧光蛋白基因(gfp)亚克隆到pCX9质粒中构建可表达的tat-gfp融合基因,再将形成的pCX 19-Tat-GFP质粒电转化转入肉葡萄球菌宿主中.提取阳性克隆子质粒进行酶切验证,表明表达载体pCX 19-Tat-GFP成功地构建并转化.用木糖诱导重组菌株后,分别使用荧光显微镜和SDS-PAGE检测外源GFP蛋白的表达分泌情况.结果显示,菌体能够发出绿色的荧光,且蛋白电泳能够在细胞质与细胞壁组分中检测到GFP蛋白条带,表明肉葡萄球菌宿主可以将表达载体pCX1 9-Tat-GFP表达的GFP在细胞质中正确折叠,并以活性形式转运到细胞壁部分.
作者：于长燕；郑秀；朱燕；孟庆艳；王梦晓；高强
来源：生物技术通报 2011 年 8期
