利用RT-PCR技术从变态反应疾病患者外周血淋巴细胞中克隆出人Cε3-Cε4基因,将其克隆至原核表达载体pET-17b中,转化大肠杆菌并进行诱导表达,SDS-PAGE后Cε3-Cε4蛋白表达量占细菌总蛋白的30.7％.菌体经裂解、2 mol/L尿素洗涤后,绝大部分杂蛋白被去除,目的蛋白纯度达85.5％.用8 mol/L尿素溶解包涵体,经Ni-NTA柱对变性状态下的目的蛋白进行纯化,并利用降低尿素梯度的方法对纯化的蛋白进行复性,最终目的蛋白纯度为95.3％.Western blotting方法对Cε3-Cε4蛋白进行鉴定,为该蛋白的进一步相关研究奠定基础.
作者：刘中成；时海浪；张艳芬；赵丽君；王培莹；常斌；李雨诗
来源：生物技术通报 2011 年 11期
