为研究红笛鲷(Lutjanus sanguineus)T淋巴细胞酪氨酸激酶(Lymphocyte cell kinase,LCK)蛋白在机体中的组织分布情况,克隆出红笛鲷lck(LS-lck)基因序列,经酶切、连接等步骤,构建重组质粒pET-28a-LS-LCK,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株后进行IPTG诱导表达.通过表达条件的优化,重组蛋白在37℃、0.03 mmol/L IPTG条件下诱导4h后获得最大表达量,且主要以包涵体形式存在.Western blot检测重组蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,表明为目的蛋白.利用纯化后的rLS-LCK重组蛋白免疫小鼠,获得了1:40000高效价的抗血清,Western blot分析显示,融合蛋白能被小鼠的阳性血清识别,说明rLS-LCK融合蛋白具有较好的免疫反应性和免疫原性.
作者：黄瑜；张雪利；蔡佳；简纪常；吴灶和；鲁义善；樊云霞
来源：生物技术通报 2013 年 12期
