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为了制备重组人GDNF牛乳腺生物反应器，采用组织块贴壁法分离培养雌性牛胎儿成纤维细胞，连续继代培养75 d，进行形态观察和染色体分析，在此基础上，转染带有新霉素抗性和红色荧光蛋白双重筛选标记的重组人gdnf乳腺特异表达载体pNR-GDNF，G418筛选阳性抗性克隆，进行PCR法鉴定。结果表明，分离培养的牛胎儿成纤维细胞具有正常的形态、分裂增殖特性和染色体数目；目的基因已整合到转基因细胞的染色体上。
作者：虞飞；李斌；张晶晶；丁海麦；张学明
来源：生物技术通报 2014 年 8期
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