旨在建立一种适合环己胺降解菌NyZ12基因无痕敲除的可靠方法。通过overlapping PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pEX18km上，将重组质粒转化到大肠杆菌S17 pir中，再通过接合转移到假单胞菌NyZ12菌株内，经pEX18km质粒上sacB基因的反向筛选得到突变株并通过PCR方法和测序鉴定。结果显示，成功构建了假单胞菌NyZ12菌株orf4637的基因突变株（NyZ12Δ4637）。通过自杀载体同源重组可以成功获得敲除的无痕突变株，且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留，为环己胺降解菌NyZ12基因功能研究提供了可靠的基因敲除技术。
作者：毛灵琪；李存治；闫达中
来源：生物技术通报 2016 年 32卷 4期
