构建 CYP2C8及其3种突变体细胞表达体系，以紫杉醇为底物研究 CYP2C8基因多态性对其酶活性的影响，以及构建 CYP2C8和 CYP3A4共转染细胞体系研究小分子激酶抑制剂对紫杉醇代谢途径的抑制。根据基因文库分别合成 CYP3A4以及CYP2C8及其3种突变体 CYP2C8*2（805A>T）、CYP2C8*3（416G>A，1196A>G）、CYP2C8*4（792C>G）的基因编码片段，将其连接到 PEGFP-N1表达质粒，测序验证。将 CYP2C8野生型及其突变体分别转染 HepG2细胞，24 h 后加入紫杉醇进行孵育，通过建立好的 LC-MS/MS 方法对代谢物进行定量分析。同时，也将野生型 CYP2C8和 CYP3A4质粒按一定的浓度比转入 HepG2细胞构建共表达体系。并筛选出合适的质粒浓度比转染细胞，在加入紫杉醇孵育时，同时加入小分子激酶抑制剂，考察小分子激酶抑制剂对紫杉醇代谢途径的抑制作用。结果表明，CYP2C8*4代谢酶对紫杉醇的代谢能力存在明显差异，其中 CYP2C8*2和 CYP2C8*3代谢活性分别是野生型的81
作者：李远；黄洁琼；李佳俊；汪维鹏；张洪建
来源：生物技术通报 2016 年 32卷 7期
