克隆我国西部丙型肝炎病毒全部结构区基因,为探讨HCV的变异和致癌作用,研制丙肝疫苗作准备.从1名西安市丙肝感染者血液中,用Trizol试剂裂解HCV病毒颗粒,用糖原与RNA共沉淀提取HCV RNA,用AMV逆转录酶和随机引物逆转录为cDNA,用RT-PCR方法扩增目的片段并转化到pGEM-T质粒,得到pGEM-T-HCVc、pGEM-T-HCVe1和pGEM-T-HCVe2克隆.将以上3个克隆用特定的酶降解,用连结酶进行连接,构建了HCV结构区的完整克隆.将克隆好的质粒pGEM-T-HCVjg从两端双向测序,得到完整的HCV结构基因cDNA核苷酸序列,总长度为2 238 bp,与已发表的HCV序列长度一致,未发现缺失或移码突变,序列中间亦未发现转录终止子.本序列与HCV1a、1b序列核苷酸的同源性分别为91.8
作者：祁欣；贾文祥；杨春；杨远；曾蔚；陈恬
来源：生物技术通讯 2004 年 15卷 2期
