目的:获得密码子优化的肺炎支原体P1黏附蛋白优势表位抗原基因,并在大肠杆菌中表达,为临床诊断试剂和疫苗研制打下基础.方法:采用生物信息学分析肺炎支原体P1蛋白的抗原表位,筛选特异性P1蛋白优势表位区；采用大肠杆菌优势密码子,设计上述P1蛋白优势表位基因序列；采用退火PCR技术合成上述基因,并利用载体pGEX-4T-2实现P1优势表位抗原在大肠杆菌中的表达；采用ELISA法对纯化的P1抗原活性进行测定.结果:肺炎支原体P1蛋白特异性抗原表位主要位于1154-1521 aa,获得的P1优化密码子基因平行突变37个稀有密码子和2个终止密码子；在大肠杆菌中表达的GST-P1融合蛋白的相对分子质量为65.9×103,纯化后重组抗原能与肺炎支原体感染者血清发生特异性的免疫反应.结论:采用密码子优化基因合成技术实现了肺炎支原体P1优势表位抗原在大肠杆菌中的高效表达,为肺炎支原体感染的诊断试剂研究提供了重要参考.
作者：张奇舒；修冰水；宋晓国；张贺秋；谢宝贵
来源：生物技术通讯 2012 年 23卷 3期
