目的：在原核表达系统中表达人乳头瘤病毒11型（HPV11）L2NE7E6融合蛋白，纯化蛋白后免疫小鼠，检测其诱发的T细胞免疫水平，并筛选HPV11 E6、E7特异的T细胞表位肽。方法：用重叠PCR方法构建HPV11 L2NE7E6融合基因并插入原核表达质粒，在大肠杆菌中经IPTG诱导表达融合蛋白L2NE7E6，用SDS-PAGE和West-ern印迹鉴定融合蛋白的表达。Q柱纯化蛋白后免疫C57BL/6小鼠，分别用覆盖HPV11 E6和E7蛋白序列的肽库，采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测其诱发的E7、E6特异的T细胞免疫反应，并筛选E7、E6特异的T细胞表位肽。结果：在原核表达系统中有效表达了HPV11 L2NE7E6融合蛋白，蛋白纯化后免疫C57BL/6小鼠，分别能检测到针对HPV11 E6、E7肽库刺激产生的特异性T细胞免疫反应。经肽池筛选到1条强的E6 T细胞表位肽E6aa41-55（AEI-YAYAYKNLKVVW）；而E7只筛选到2条弱的T细胞表位肽，分别为E7aa53-67（QILTCCCGCDSNVRL）和E7aa73-87（DGDIRQLQDLLLGTL）。结论：HPV11 L2NE7E6融合蛋白能诱发小鼠产生E6、E7特异性细胞免疫反应，可作为尖锐湿疣免疫治疗候选疫苗。
作者：任皎；赵莉；张卉；郝明强；周玲；田厚文；谭文杰；阮力
来源：生物技术通讯 2014 年 4期
