目的：制备抗结核分枝杆菌RpfB结构域单克隆抗体。方法：将pPRO-EXHT-RpfB domain原核表达载体接种于大肠杆菌DH5中，用IPTG诱导表达RpfB结构域蛋白，以纯化的RpfB结构域蛋白作为免疫原，皮下包埋免疫小鼠3次，每次间隔2周；分离小鼠的脾细胞，与Sp2/0细胞融合，克隆化制备抗RpfB结构域单抗，ELISA检测其效价，鉴定其特异性和相对亲和力，观察制备的抗RpfB结构域单抗对Rpf家族其他蛋白的识别能力及其对结核分枝杆菌和藤黄微球菌的生长抑制作用。结果：制备了3株抗RpfB结构域单抗，特异性高，亲和力较强，均能特异性识别RpfB结构域。经小鼠腹腔注射制备腹水并纯化，获得了较高纯度的单抗，所制备的抗RpfB结构域多肽的单克隆抗体可以识别多种Rpf样蛋白及其结构域蛋白。在抗体滴度为1∶1000时可有效抑制RpfB结构域对结核分枝杆菌H37Ra和藤黄微球菌的生长促进作用，提示抗RpfB结构域单抗可能会抑制进入机体内生长停滞或潜伏感染的结核分枝杆菌的再次激活，可能具有预防隐性感染复发的作用。结论：抗RpfB结构域单抗的制备为进一步研究RpfB结构域的生物学和免疫特性提供了实验工具。
作者：樊爱琳；马越云；郑善銮；杨麦贵；郝晓柯
来源：生物技术通讯 2014 年 6期
