目的:原核表达并纯化、鉴定人生长分化因子15(GDF-15),制备其多克隆抗体.方法:从人结肠癌细胞系HT29的cDNA扩增出GDF-15基因片段并插入pET-32a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达重组GDF-15,用镍亲和柱纯化,SDS-PAGE、Western印迹鉴定重组蛋白.用纯化的重组GDF-15免疫BALB&小鼠制备多克隆抗体,鉴定并检测其效价.结果:制备了pET-32a(+)-GDF-15表达载体;经IPTG诱导重组蛋白表达后,采用Ni亲和柱纯化蛋白,并经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定;免疫BALB/c小鼠后获得了GDF-15多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:100 000,并应用于肿瘤细胞的GDF-15检测中.结论:用基因工程和免疫学方法制备了重组人GDF-15及其多克隆抗体,为后续的分子机制和靶向治疗研究奠定了基础.
作者：田钰茜；张阔；郝强；李维娜；张存；张英起；张伟
来源：生物技术通讯 2015 年 26卷 3期
