目的:原核表达重组骆驼源单域抗体并纯化.方法:将雌二醇特异性的单域抗体基因片段克隆到pET32a载体中,经IPTG诱导表达后对形成的包涵体进行纯化,利用间接ELISA法检测获得的单域抗体的活性,并以孕酮、雌酮和雌三醇为对照,鉴定雌二醇单域抗体的特异性.结果:重组雌二醇单域抗体的相对分子质量约为34×103,通过大肠杆菌BL21(DE3)-pET32a构建的原核表达体系实现了雌二醇单域抗体的高水平表达,并通过包涵体纯化获得了可溶性的高纯度单域抗体抗体,经间接ELISA检测,该雌二醇特异性抗体的50％抑制浓度(IC50)为20.03 ng/mL,对孕酮和雌酮2种化合物的交叉反应率分别为29.78％和1.63％,特异性较好.结论:通过构建原核表达体系,可以获得功能性的骆驼源单域抗体.
作者：刘超；彭媛；宁保安；高志贤
来源：生物技术通讯 2016 年 27卷 3期
