本研究旨在克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-hHSP90β,为研究hHSP90β的基因治疗奠定实验基础.按Invitrogen公司操作说明用TRIzol Reagent提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA.用纯化的hHSP90βcDNA与PGEM Easy T Vector连接,挑选白色菌落进行鉴定,结果为重组质粒,命名为PGEM-hHSP90β.将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflⅡ和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化XL1-blue,经复苏后,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆.挑取的LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功,命名为pcDNA3.1(+)-hHSP90β.采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插入了真核表达载体pcDNA3.1(+)中.
作者：刘涛；赵菊梅；田聆；魏于全；梁传余
来源：生物医学工程学杂志 2006 年 23卷 6期
