目的定点突变法扩增制备完整hHGF-α cDNA，克隆并构建其原核表达载体。方法与结果以含有人HGF cDNA全序列的质粒pRC/CMV-hHGF为模板，设计合成一对特异引物进行聚合酶链反应(PCR)，扩增hHGF-α cDNA基因，琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示扩增得到了1.34 kb长的目的基因产物。将扩增产物以限制性内切酶Xho Ⅰ酶将其切为386 bp、954;bp两个片段，分别以EcoR Ⅰ/Xho Ⅰ、Xho Ⅰ/BamH Ⅰ与pBSKS载体连接重组，对目的基因分段克隆后进行序列测定，结果表明除通过定点突变引入的起始密码ATG、终止密码子TAA、TGA及EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ识别位点外，扩增得到的PCR产物序列与Nakamura等报道的HGF cDNA中不包括前体序列的α链部分完全相同。将以EcoR Ⅰ/Xho Ⅰ、Xho Ⅰ/BamH Ⅰ从pBSKS-HGF-α 386、pBSKS-HGF-α 954中切出的386 bp、954 bp两个片段以EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ与pBV220连接构建重组表达质粒pBV220-HGF-α，限制性内切酶图谱分析显示HGF-α cDNA插入到载体pBV220的EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ位点，插入方向正确。温度诱导表达，SDS-PAGE显示一分子量与单体hHGF-α链吻合的蛋白带，证明表达质粒构建成功。结论设计制备了hHGF-α链cDNA，克隆建立了hHGF-α链原核表达质粒。
作者：党素英；程牛亮；牛勃；王惠珍；赵建滨；张祖珣
来源：山西医科大学学报 2001 年 32卷 2期
