目的 构建青色荧光蛋白(CFP)基因和黄色荧光蛋白(YFP)基因相连接的真核表达载体pYFP-CFP,并检测融合蛋白CFP-YFP的FRET转移效率,为FRET技术提供阳性参照物. 方法 利用基因重组法,以带有CFP基因序列的质粒(pCFP)为模板,扩增CFP基因并插入黄色荧光蛋白载体(pYFP)的多克隆位点中,构建真核表达质粒pYFP-CFP.经细胞转染后,使其表达CFP和YFP相连的融合蛋白.在激光共聚焦显微镜下采集FRET信号图和FRET转移效率(EFRET)的计算,并比较和分析表达CFP-YFP的阳性细胞与CFP和YFP共表达的阴性细胞. 结果 真核表达质粒pYFP-CFP构建成功,并在细胞质中表达,这与pCFP和pYFP共转染的细胞中荧光蛋白的分布略有不同,后者在细胞胞质和细胞核中均有表达.统计结果显示表达融合蛋白的阳性组EFRET明显高于共表达的阴性组,差异有统计学意义. 结论 融合荧光蛋白分子的青色和黄色蛋白之间具有10个氨基酸残基相连,符合FRET现象发生的条件,能够采集到很强的FRET信号,可作为FRET研究的稳定阳性实验参照.
作者：金艳燕；邓君；金良韵；肖忠新；徐志卿；张进禄；赵君朋；薛冰
来源：山西医科大学学报 2015 年 46卷 11期
