目的：构建 DD3（PCA3）启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 TRAIL 过表达腺病毒载体，并对其进行病毒包装及滴度测定。方法：将 DD3启动子用分子克隆技术替换掉穿梭质粒 pHBAd －U6－GFP原有启动子 U6，再用 AgeI 单酶切将制备的重组质粒 pHBAd －DD3－GFP 线性化，将 TRAIL 基因片段克隆至线性化 pHBAd －DD3－GFP 上，经抗性筛选后 PCR 及测序鉴定为 pHBAd －DD3－TRAIL 载体。将其连同病毒骨架质粒 pHBAd －BHG 共同转染至 HEK293细胞包装成病毒并扩增，测定病毒感染性滴度。结果：经 PCR及测序验证证实成功构建 DD3启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 TRAIL 过表达腺病毒载体 pH-BAd －DD3－TRAIL 并包装扩增，病毒滴度为1．58×1010 PFU ／ml。结论：构建 DD3启动子调控的凋亡配体TRAIL 过表达重组腺病毒，可用于下一步在前列腺癌细胞中特异性地表达及诱导细胞凋亡杀伤靶细胞效应研究中。
作者：刘雷；黄星华；李坚伟；周建华；陈统权
来源：现代肿瘤医学 2016 年 24卷 17期
